黑龙江省鹅副粘病毒病的分离与鉴定

ferdinand

　　一、1病原分离
　　将病死鹅肝、脾、胰等组织，先做细菌学检查，然后按 1:5 常规处理后，取上清液，接种 9 日龄 SPF 鸡胚， 37 ℃ 孵化 36-72h ，待鸡胚死亡后，置 4 ℃ 冰箱过夜，收取尿囊液和绒毛尿囊膜连传三代，并观察胚体，全身充血呈鲜红色，尤以背、胸、头部出血显著。
　　2测定
　　用 F 3 代尿囊液按 1:10 倍比稀释后，接种 9 日龄 SPF 鸡胚，每稀释度接种 6 枚，并设对照。连续观察 5 天，统计死亡数，按 Reed-Muench 法计算。
　　3病毒纯化和电镜观察
　　取 F 3 代尿囊液，经过高速离心，超速离心，等密度蔗糖梯度离心后收取目标区带，经磷钨酸负染后，在东北农业大学电镜室电镜观察。
　　4免疫保护试验
　　用本站研制的灭活疫苗接种 11~19 日龄的鹅、鸭进行免疫， 3 周后攻毒，攻毒株为 F 3 代尿囊液 1:200 稀释后 0.1ml/ 羽，并测定免疫前后抗体滴度，观察保护情况。
　　5血清学检查
　　对 1999 年以来我省十个鹅场的 208 份鹅血清，进行新城疫和禽流感血清学抗体检测。
　　二、1鹅副粘病毒病的流行特点调查结果
　　发病**小的仅 3 日龄，**的为 300 余日龄。发病率为 16-100% ，平均为 32% ，其中 15 日龄以内雏鹅的发病率和死亡率可以达到 100% 。发病鹅群日龄越小对本病越敏感(发病率和死亡率越高)，而且病程短、很少康复。临床特点主要是腹泻。患病鹅排灰白色或黄色、暗红色、绿色、墨绿色水样稀便，体重迅速减轻。 10 日龄左右病鹅有甩头、咳嗽等呼吸道症状。病变特点为典型症状为肠粘摸纤维性坏死。肠粘摸有灰白色或淡黄色芝麻粒大到小蚕豆大纤维性坏死结痂，剥离后为出血性溃疡。脾脏肿大有散在的从芝麻粒大到绿豆大小的灰白色坏死灶。胰脏肿大有灰白色坏死灶。部分病鹅的腺胃及肌胃充血出血。脑充血郁血，心肌变性。肝脏肿大瘀血，质地较硬，有数量不等大小不一的坏死灶。
　　2病原分离
　　细菌检查结果，鹅肝、脾分别接种绵羊鲜血培养基作嗜氧和厌氧培养均为阴性，肝、脾作组织触片用姬姆萨和革兰氏染色镜检，均未见细菌。从尿囊腔接种**代就分离到病毒，经三代后其死亡时间稳定在 36~48 小时，死亡胚体充血和出血明显。分离毒能凝集鸡红细胞(见表 1 )。
　　3分离毒与 ND 阳性血清的 HI 价为 2 10 ，与 AI 阳性血清的 AGP 为阴性。病鹅血清与 ND 抗原的 HI 价为 2 7 ，与 AI 抗原的 AGP 为阴性。分离毒不能被禽流感标准阳性血清( H 5 、 、 H 9 )抑制。分离毒与病鹅血清的 HI 价为 2 11 。
　　4电镜观察 可见病毒颗粒呈大小不一形态不正的多形性，有囊膜，病毒颗粒大小平均直径在 120nm 左右。