中药组方对猪大肠杆菌病的抑菌及临床治疗试验

ferdinand

　　笔者根据中药治疗鸡大肠杆菌病的经验，采用中药茜草、苦参等13味中药组方对人工感染仔猪大肠杆菌引起的腹泻进行了治疗试验，结果，治愈率达90%以上。同时探讨了中药组方对仔猪大肠杆菌耐药菌株和非耐药菌株所致腹泻的治疗效果。
　　
　　1 材料与方法
　　
　　1.1 试验药物 中药组方由茜草200 g、苦参150 g、穿心莲100 g、蒲公英60 g、白头翁70g、黄柏60 g、地榆60 g、黄芪60 g、白术50 g、诃子肉40 g等13味中药组成。按配方比例称量备用。中药材购于临沂市医药公司药材供应站；痢菌净注射液（批号20031120）、庆大霉素注射液（批号20030914）由山东鲁南兽药厂提供。
　　
　　1.2 药敏试纸 由山东农业大学动物科技学院兽医药理教研室提供（批号040221）。
　　
　　1.3 试验菌种 采自发病猪场。根据临床症状和病理剖检确诊为大肠杆菌病的病猪，进行细菌培养分离鉴定为大肠杆菌。并经药敏试验筛选对多种抗生素敏感和不敏感的菌株各一种，分别定为Ⅰ号大肠杆菌和Ⅱ号大肠杆菌，然后做动物回归试验，确定为致病性大肠杆菌。然后接种于普通肉汤培养基中进行培养增菌24 h，经检验每毫升肉汤中大肠杆菌活菌数不少于5×108个/ml。
　　
　　1.4 中药制备 取中药1 000 g，先加水温浸1 h，煎煮2次，第1次1 h，第2次40 min，合并滤液，冷却滤过，将滤液加热浓缩至1 ml药液含生药1 g，加入3 g苯甲酸钠，混均，冷却48h，滤过分装，即得。
　　
　　1.5 受试动物 由临沂师范学院郯南养殖基地提供，选用出生2～3日龄，体重约1.5 kg左右的健康三元杂交仔猪〔杜洛克×（约克夏×长白）〕100头，随机分为10组，每组10头，受试期间饲养管理条件基本一致。
　　
　　1.6 中药组方体外抑菌试验 取上述中药试验药液和Ⅰ号大肠杆菌、Ⅱ号大肠杆菌备用。试验方法按 《养禽场禽病检验手册》(傅先强等，1992)，细菌对药物敏感性测定方法进行。
　　
　　1.7 试验分组 Ⅰ组为空白对照组，不感染不给药；
　　
　　Ⅱ组为Ⅰ号大肠杆菌阳性对照组，感染不给药；Ⅲ组为Ⅱ号大肠杆阳性对照组，感染不给药；Ⅳ组为Ⅰ号大肠杆菌中药治疗组，接种Ⅰ号大肠杆菌使其发病后，用试验药液按1 ml／kg体重喷口给药,2次／天，连用3天；Ⅴ组为Ⅰ号大肠杆菌庆大霉素治疗组，接种Ⅰ号大肠杆菌发病后，用庆大霉素8万IU/kg体重喷口给药，2次／天，连用3天；Ⅵ组为Ⅰ号大肠杆菌痢菌净治疗组，接种Ⅰ号大肠杆菌发病后，用痢菌净按5 mg／kg体重喷口给药，2次／天，连用3天；Ⅶ组为Ⅱ号大肠杆菌中药治疗组，接种Ⅱ号大肠杆菌发病后，用试验药液按1 ml／kg体重喷口给药，2次／天，连用3天；Ⅷ组为Ⅱ号大肠杆菌庆大霉素治疗组，接种Ⅱ号大肠杆菌发病后，用庆大霉素8万IU/kg体重喷口给药，2次／天，连用3天；Ⅸ组为Ⅱ号大肠杆菌痢菌净治疗组，接种Ⅱ号大肠杆菌发病后，用痢菌净按5 mg／kg体重喷口给药，2次／天，连用3天；Ⅹ组为安全试验组，不感染，按中药治疗剂量的6倍给药。除对照组及安全试验组外，其余按以上分组每头仔猪口服Ⅰ号大肠杆菌或Ⅱ号大肠杆菌悬液1 ml，菌液活菌数不少于5×108个/ml。
　　
　　1.8 治疗 感染大肠杆菌18 h后，各感染组即出现发病症状，腹泻，粪便呈黄色或灰白色，稀薄带有气泡。此时按各组设计用药剂量途径给药。连续用药3天停药，观察3天。用药期间每日观察各组临床症状情况，并记录死亡头数，剖检及细菌培养鉴定确定死因，试验结束后，空白对照组与安全试验组随机各取3头仔猪剖杀，记录病变情况，并进行病理组织学检查。
　　
　　1.9 疗效判定标准 治愈：凡在试验期间经治疗，症状消失。粪便、饮食欲及精神恢复正常者。有效：除完全治愈的病猪为有效外，凡试验期间未死亡，并且症状明显减轻，粪便、精神、饮食欲有好转者。无效或死亡：凡在试验期间出现大肠杆菌典型腹泻症状，经治疗其症状无好转或死亡，剖检及细菌培养鉴定为大肠杆菌者。
　　
　　2 结果与分析
　　
　　2.1 抑菌效果 经试验，中药组方对耐抗生素和不耐抗生素的大肠杆菌均有较好的体外抑菌作用。见表1。
　　
　　2.2 治疗结果 人工感染大肠杆菌18 h后，开始出现临床症状，空白组和安全试验组无症状。各感染组仔猪出现腹泻，粪便呈黄色或灰白色，稀薄带有气泡，饮食欲减少，个别仔猪有脱水现象。症状出现后各组按设计用药剂量及途径给药，用药后第2天，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ 4个给药组病情较快得到控制，症状逐渐减轻，活动增加，大部分仔猪饮食欲开始恢复；而Ⅱ、Ⅲ、Ⅷ、Ⅸ 4个试验组病情进一步恶化，病情严重者出现脱水死亡。停药后观察3天试验结束，空白对照组和安全试验组随机各取3头仔猪剖杀。见表2。

　　
　　经统计学处理，药敏试验大肠杆菌敏感的给药组(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ)之间治愈率无显著差异
　　
　　(P>0.05)，说明中药对耐药菌株和敏感菌株都有较好治疗作用，与庆大霉素、痢菌净等常用抗生素（无耐药性菌株）治疗效果无差异。大肠杆菌对庆大霉素、痢菌净耐药的Ⅷ、Ⅸ组之间治疗作用无显著差异(P>0.05)，而Ⅷ、Ⅸ组与Ⅶ组之间治疗效果差异极显著（P<0.01），这说明中药对产生耐药性的菌株仍有较好的治疗作用。而庆大霉素、痢菌净对其有耐药性的菌株治疗效果极差，其治愈率与Ⅱ、Ⅲ组差异不显著(P>0.05)。
　　
　　2.3 安全试验分析 在同等条件下，按中药治疗剂量的6倍给药，期间未发现任何不良反应，试验结束后3天剖检观察各脏器无异常变化，安全试验组与空白对照组间也无肉眼可见的差异，主要器官（肝、胃、十二指肠、空肠、回肠和肾）组织切片亦未见异常变化。说明该药有效且安全。

　　
　　3 小结与讨论
　　
　　3.1 中药组方经体外抑菌试验证明，对耐药菌株和非耐药菌株都有较好的抑菌作用。这说明中草药经过合理的配伍，在体外也有很好的抑杀菌作用。
　　
　　3.2 通过上述试验可以说明中药组方对抗生素有耐药性的大肠杆菌或无耐药性的大肠杆菌引起的腹泻都有极好的治疗作用。治愈率达90%以上，有效率达100%。
　　
　　3.3 中药制剂在体外抑菌试验不如庆大霉素和痢菌净，但其治疗效果无明显差异。这充分证明中药标本兼治的优越性，体现了中医所说“药有个性之特长，方有合群之妙用”的精妙之处。同时也说明用中药治疗畜禽疾病是有效防止药残和耐药菌株出现有效途径。值得应用推广。
　　
　　表4 父母代种鸡与商品代蛋鸡经H5H9疫苗免疫后HI抗体检测
　　
　　3 讨论
　　
　　3.1 在同样的饲养管理条件下，同一群鸡在免疫同一种疫苗后，本试验发现鸡群的抗体效价也不一样，离散度有时也较大，说明鸡群的免疫效果与鸡群的健康状况、整齐度等生物安全措施有很大的关系。以上各表可看出H9的免疫效果较H5要高1～2个滴度。
　　
　　3.2 表3是用不同免疫剂量对AI疫苗中H5HI的检测，通过注射疫苗后不同时期对部分鸡只的剖检未发现因免疫剂量加大而发生的肉眼可见的吸收障碍，但攻毒试验表明，在免疫期内对AIV的攻击均可获得高保护率。因当时养殖户主要应用二价苗，本试验未做H5单价苗的HI抗体检测，对于AI二价苗中H9对H5免疫效果的干扰协同作用目前看法不一，有待于进一步研究。
　　
　　3.3 禽流感HI抗体在免疫鸡的抗感染免疫中起主要作用，从本试验的AIHI抗体检测的结
　　
　　果来看，HI抗体可以作为鸡群抗AIV抗体水平及总体免疫水平的参考指标，在生产上可以通过鸡群抗AIV的HI抗体水平的结果来制定合理的免疫程序，以达到有效预防控制禽流感的目的。在本地区，建议禽流感疫苗首免在20～30日龄，二免在110～120日龄，以后每4～5个月加强免疫1次。